摘要：利用高效液相示差折光分析法测定D-氨基葡萄糖盐酸盐中的N-乙酰-D-氨基葡萄糖，方法采用Alltech C18柱(250× 4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-醋酸盐缓冲液(3∶97)，流速1 mL /min,柱温40℃ ，进样量20μL.N-乙酰-D-氨基葡萄糖在4.18～ 1 079.33μg mL范围内呈显著的线性关系，相关系数为0.9993，方法的加标回收率98.78%，检出限4.18μg mL。

　　关键词:HPLC，D-氨基葡萄糖盐酸盐， N-乙酰-D-氨基葡萄糖。D-氨基葡萄糖盐酸盐(C6H11O5NH2·HCl)(D-Glucosamine Hydrochloride)，是一种海洋生物制剂,在人体内具有重要的生理意义：参与肝肾解毒，具有抗炎保肝等作用，在医药上用于风湿性关节炎症和胃拜迪生物一瓶巅峰溃疡疾病[1]，同时也是食品甜味剂,抗氧剂,又是双歧杆菌培养基的主要成分之一；在制备D-氨基葡萄糖盐酸盐的过程中,容易产生杂质N-乙酰-D-氨基葡萄糖，所以为了对D-氨基葡萄糖盐酸盐的质量进行控制，建立了检测N-乙酰-D-氨基葡萄糖杂质的方法。目前已有HPLC示差折光分析法测定糖类物质的文献[2～ 3]，但还未见测定N-乙酰-D-氨基葡萄糖的报道，由于D-氨基葡萄糖盐酸盐和N-乙酰-D-氨基葡萄糖均无紫外吸收，结合本实验室情况,本实验采用HPLC-RID法检测，该方法快速、灵敏,结果准确可靠，为D-氨基葡萄糖盐酸盐的纯度检测提供了依据。

　　氨基葡萄糖配图

　　1 实验部分

　　1.1 仪器与设备

　　日本岛津LC-6A型高效液相色谱仪；RID-6A示差折光检测器；KQ-500DB型数控超声波清洗器。

　　1.2 试剂

　　乙腈（色谱纯）；水为超纯水；N-乙酰-D-氨基葡萄糖标准品。

　　醋酸盐缓冲液：称取0.80g醋酸钠和0.98g正庚烷磺酸钠，加入970ml水溶解，用冰醋酸调节PH至4.5。

　　2 实验方法

　　2.1 色谱条件

　　C18色谱准（250x4.6mm,5μm），流动相为乙腈-醋酸盐缓冲液（3：97），流速1ml/min，柱温：40℃，进样体积为20μL。

　　2.2 溶液的制备

　　2.2.1 标准品溶液的制备

　　精取122.88 mg N-乙酰-D-氨基葡萄糖于25 mL容量瓶中，加水溶解并定容至刻度，摇匀得4.915 2 mg/mL。

　　2.2.2 样品溶液的制备

　　称取50mg样品，置于25ml容量瓶中，加水溶解并定容至刻度，摇匀，超声5min，过0.45μm滤膜，即得。

　　2.3 系统适应性实验

　　取标准品溶液（a)，空白溶液(b)，样品一瓶巅峰咖啡官网溶液(c)，各20μL注入色谱仪，记录色谱图如下：

　　3 结果与讨论

　　3.1 标准曲线的绘制

　　配制一系列标准品溶液，进样20μL，进行HPLC分析，以峰面积(Y)对进样量(X)进行回归计算，得线性回归方程Y=217.18X+ 17.15,R=0.999 3，线性范围为4.18～ 1 079.33μg/mL。

　　3.2 精密度实验

　　精取同一标准品溶液(0.491 5 mg/mL)重复进样6次，每次20μL,记录峰面积，得到RSD=1.48%,说明仪器精密度良好。

　　3.3 回收率实验

　　精密称定3份样品,分别加入已知浓度的标准品(0.491 5 mg/mL)，按供试品溶液制备方法制备，按前述方法进行HPLC,进样量为20μL.回收率计算结果见表1：

　　平均回收率为98.78%。

　　3.4 方法检出限

　　将N-乙酰-D-氨基葡萄糖的标准溶液进行稀释后取一瓶巅峰能量咖啡样，得到方法的检出限(3倍基线噪音)为:4.18μg/mL。

　　3.5 实际样品的测定

　　取5批D-氨基葡萄糖盐酸盐，按上述实验条件进行测定,结果均未检出N-乙酰-D-氨基葡萄糖，说明这5批样品均合格。

　　文献

　　[1] 沈荣明.D-氨基葡萄糖盐酸盐的制备研究[J].胡州职业技术学院学报,2004,2(4):85- 88.

　　[2] 李敬慈,丁天惠.高效液相色谱法分析蜂蜜中的糖[J].分析测试学报,1995,14(5):62- 65.

　　[3] 施燕支,郭雪清,余启荣等.HPLC示差折光分析法测定口香糖中的木糖醇等多种糖醇的含量[J].首都师范大学学报,2005,26(1):61- 63.

　　[4] 王英锋，晏利芝，郭雪清.HPLC示差折光分析法测定D-氨基葡萄糖盐酸盐中的N-乙酰-D-氨基葡萄糖[J].一瓶巅峰咖啡多少钱首都师范大学学报(自然科学版),2008,29(1):40-41.

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